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選擇3～5輪后，隨機(jī)挑取克隆加入96孔微量滴定板中并誘導(dǎo)表達(dá)可溶性scFv。然后，在包被有相關(guān)抗原的96孔微量滴定板中，用ELISA分析含有可溶性scFv的細(xì)菌上清。此過程可以識(shí)別出那些結(jié)合了抗原的scFv。但即便采用上述嚴(yán)謹(jǐn)性選擇后，ELISA陽(yáng)性克隆中僅有部分克隆的親和力比野生型高。ELISA信號(hào)強(qiáng)度不能很好地顯示哪個(gè)克隆具有較低的Ka值，而且更為普遍的是它與scFv表達(dá)水平相關(guān)。因此，這就需要一種篩選ELISA陽(yáng)性克隆的技術(shù)，能識(shí)別出具有較低Ka值的克隆。競(jìng)爭(zhēng)性或抑制性...
A液（80ml）：1％氯化金，lml；雙重蒸餾水，79ml。B液（20m1）：1％檸檬酸鈉，4ml；1％單寧酸，0.lml；雙重蒸餾水，15．8ml。25mmol/LK2C03，0．1ml；將上述A液加熱到60℃，然后將B液快速加入到A液中，繼續(xù)攪拌，在極短的時(shí)間內(nèi)加熱到煮沸（大約10min），此時(shí)顏色由黑一藍(lán)一亮紅（近似紅葡萄酒顏色）變化。pH調(diào)到所需要求（根據(jù)所標(biāo)記蛋白質(zhì)種類的不同，所需的pH也不一樣）。上述用量合成的膠體金為10nm，根據(jù)所加入鞣酸（或稱單寧酸）量的不同...
乙醇—超聲波還原法（Baigent和Muller，1980）（1）取1％AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml雙重蒸餾水。（2）用0．2m01/LK2C03調(diào)pH至7．2，再加入lml無(wú)水乙醇。（3）用20KC、135W超聲波探頭浸入溶液內(nèi)進(jìn)行超聲振蕩，此法制備的顆粒為6～10nm。硼氫化鈉還原法（Tschopp等，1982）（1）取0．6ml1％氯化金水溶液，加入40ml預(yù)冷（4℃）雙蒸餾水。（2）再加入0．2mol/LK2C030．2ml。（3）邊攪拌邊加入新鮮配制...
『安全』是進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)zui重要的考量，若不留意，經(jīng)常會(huì)造成*的遺憾，因此，請(qǐng)遵守以下各項(xiàng)規(guī)定：1.請(qǐng)事先勘查緊急沖洗站、洗眼臺(tái)及滅火器的位置。2.請(qǐng)避免穿著涼鞋或拖鞋（腳趾不要裸露），并請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)衣。留長(zhǎng)發(fā)者，在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前將頭發(fā)束好。3.在實(shí)驗(yàn)室請(qǐng)勿吸煙、化妝、嚼口香糖、吃東西、喝飲料。食物不可存放于實(shí)驗(yàn)室的冰箱中。4.實(shí)驗(yàn)前后請(qǐng)將工作區(qū)域清理擦拭干凈，實(shí)驗(yàn)中打翻任何藥品試劑時(shí)，要隨時(shí)清理；離開實(shí)驗(yàn)室前請(qǐng)記得洗手。5.使用刻度吸管時(shí)，切勿用嘴吸取，請(qǐng)用安全吸球或吸管唧筒。6...
微量移液器（micropipet）是進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)或分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的*工具，然而使用方法的正確與否，以及微量移液器的準(zhǔn)確性，都直接影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性，故請(qǐng)對(duì)你持有之微量移液器作深入的認(rèn)識(shí)。本實(shí)驗(yàn)室所使用的微量移液器為GilsonPipetmanP系列，包括P1000,P200,P20等。以下使用方法及注意事項(xiàng)，部份取材自原廠所附說明書，請(qǐng)?jiān)斪x之后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1）請(qǐng)參照?qǐng)D1.1，認(rèn)識(shí)微量移液器每一部份組件之位置及名稱。2）將D（ejector）取下，C（connectingn...
儀器用具：迷你電泳槽及鑄膠器（MupidII）；UVtransilluminator及影像分析系統(tǒng)；防護(hù)面罩藥品試劑：瓊脂糖粉末（agarose,lowEEO）1×TAE電泳緩沖液（40mMTris-acetate,1mMEDTA,pH8.0）：由50×TAE（每1L含242gTrisbase,57.1mLglacialaceticacid,100mL的0.5MEDTA-8.0）稀釋使用。10×追蹤染劑（0.25%bromophenolblue,0.25%xylenecyan...
儀器用具：37℃及65℃水浴或恒溫槽藥品試劑：質(zhì)體pBluescriptIISK（-）限制酶：BamHI,PvuII及ScaI（濃度均為10units/μL,Invitrogen）10×Reactionbuffer6（0.5MTris-HCl,pH7.4;60mMMgCl2;0.5MNaCl;0.5MKCl）無(wú)菌水方法步驟：1）取7支微量離心管，依下表所列體積（單位μL）依序加于管壁不同位置上?！裘看挝∠拗泼笗r(shí)，請(qǐng)換一支新的微量移液器頭以免造成污染?？傮w積為20μL，短暫離...
方法步驟：1）前一天轉(zhuǎn)形的培養(yǎng)皿，當(dāng)菌落長(zhǎng)至約0.5mm大小時(shí)，將培養(yǎng)皿移至4℃放置1h。2）準(zhǔn)備一張無(wú)菌的硝化纖維濾膜，以鉛筆在邊緣標(biāo)上組別?！粽?qǐng)戴手套后再拿取濾膜！3）打開培養(yǎng)皿蓋子，以兩支扁平鑷子將濾膜兩邊夾住，輕輕覆蓋在菌落上方，盡可能避免有氣泡產(chǎn)生?！糇⒁?！濾膜覆蓋上去后就不要再移動(dòng)！4）等濾膜*濕透后，以針頭在濾膜邊緣戳洞做記號(hào)（至少做三個(gè)記號(hào)）。小心把濾膜掀起，菌落朝上放置在LB/Amp/IPTGplate上。蓋上蓋子，在37℃培養(yǎng)2~4h，以誘導(dǎo)啟動(dòng)T5pro...
當(dāng)前位置：
