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1．使用來自篩選出的噬菌?？寺〉哪０鍰NA，以及包含與AP融合表達載體的克隆位點相對應的限制性酶切位點的寡核苷酸引物，進行PCR反應。2．通過瓊脂糖凝膠電泳檢測正確大小的擴增產(chǎn)物。選擇相應方法對PCR產(chǎn)物進行純化。3．用對應于克隆位點的限制性內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，使用標準的方法將此產(chǎn)物連接到相同酶切后的AP融合蛋白表達載體中。4，通過標準的方法將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，鋪到含100ug/ml氨芐青霉素的LB平板上。挑取單克隆，利用標準的方法（如限制性酶切或PCR）鑒定是否有...
麥芽糖結合蛋白ELISA的方法與以前論文所述一致[1Sj，除了從大腸桿菌中釋放MBP—肽融合蛋白的裂解方法之外。我們發(fā)現(xiàn)，使用商業(yè)性的去垢劑（Pierce公司的B-PER抽提試劑）較溶菌酶能更簡單有效地裂解細菌細胞。3ml培養(yǎng)基中的經(jīng)誘導的細胞先通過沉降，再通過含有0．1mmol/LEDTA的lmlB-PER重懸。于室溫下放置20分鐘后，離心5分鐘以除去細胞碎片，將上清轉(zhuǎn)移到一個新的管中。裂解物于一70~0凍存，當用于ELISA反應時按1：50稀釋。在幾個實驗項目中，我們發(fā)現(xiàn)...
1．合成需要的靶標DNA或RNA寡核苷酸，其中一組是5’端連接生物素的寡核苷酸鏈。為dsDNA位點合成一條不聯(lián)結生物素的互補副鏈。2．①對于DNA位點的篩選，將每條寡核苷酸鏈各取10u1，與20/A1的2X核酸退火緩沖液混勻，讓兩條互補的寡核苷酸退火。在PCR儀中以94℃加熱樣品3分鐘，然后以每分鐘2℃的速度冷卻至4℃。冷卻后，用水將溶液稀釋至1pmol/L的終濃度，于-20℃保存。②對于RNA位點篩選，用RNA折疊緩沖液（1XCM）配制1pm01/L的寡核苷酸溶液。將溶液加...
A.噬菌體的制備1．挑取含有源自文庫篩選的噬菌體克隆的單菌落。用滅菌牙簽挑取單菌落接種于滅菌圓底培養(yǎng)板的微孔內(nèi)，其中加有150ul含15ug/ml的四環(huán)素的2×TY培養(yǎng)基。用一個微孔培養(yǎng)展示野生型DNA/RNA結合區(qū)域的噬菌體，作為陽性對照。以250r/min的速度小心振蕩微孔板，30℃培養(yǎng)16小時。2．在合適的吊斗式離心機中3700g離心96孔培養(yǎng)板15分鐘，以制備噬菌體上清液。將上清液轉(zhuǎn)移到一個新的微孔板內(nèi)，4℃保存。B.噬菌體ELISA1，將生物素聯(lián)結的核酸靶標位點（通...
植物體內(nèi)的一種激素脫落酸可幫助植物對抗干旱等惡劣生存條件，但科學界對這類植物激素的具體作用機制卻知之甚少。西班牙等國研究人員日前發(fā)現(xiàn)脫落酸幫助植物抗旱的具體機制，為有效提高植物抗旱能力開辟了新思路。此前研究曾發(fā)現(xiàn)，在正常環(huán)境下，植物體內(nèi)一種名為PP2C的蛋白質(zhì)會阻止脫落酸發(fā)揮作用，當植物處于極度干旱條件下時，這種阻斷作用就會消失，植物細胞中脫落酸的含量上升，從而幫助植物抗旱。研究同時認為，PP2C蛋白質(zhì)并不會直接作用于脫落酸，而是通過另外一群蛋白質(zhì)間接發(fā)揮作用。這些“中介蛋白...
體外診斷產(chǎn)業(yè)是醫(yī)療器械及醫(yī)藥工業(yè)的一個組成部分，中國體外診斷產(chǎn)業(yè)是個新興產(chǎn)業(yè)，共有20二十年左右的發(fā)展歷史，是一個自發(fā)形成和成長起來的產(chǎn)行業(yè)。體外診斷是指將樣本（血液、體液、組織等）從人體中取出后進行檢測進而進行診斷，是相對于體內(nèi)診斷而言。檢測過程中需要相應的儀器和試劑，而這些儀器和試劑就組成了體外診斷系統(tǒng)，從事這些儀器和試劑研發(fā)、生產(chǎn)和營銷的企業(yè)就形成了體外診斷產(chǎn)行業(yè)，它匯集了生物、醫(yī)學、電子、機械等相關技術。體外診斷產(chǎn)品按檢驗醫(yī)學的檢測項目可分為幾個主要大類：生化、免疫、...
該系統(tǒng)的主要影響因素是因在蛋白上引入標記物可導致蛋白生物活性改變，因為標記的結果，本質(zhì)上是制造了一個由目的蛋白和標記物氨基酸序列融合而成新的蛋白。因此，使用該技術時，應該認識到是研究新的蛋白特性，而不是研究蛋白的原來特性。但實踐經(jīng)驗表明這并不成為很大的問題，通過標記蛋白獲得的信息可以采用針對原始未標記蛋白的抗體證實。第二方面的主要影響因素是在進行表位標記時，許多目前使用的標記物是由已知的蛋白（如myc基因產(chǎn)品）片段組成。這意味著抗標記物抗體不僅識別被研究的標記蛋白，同時還可能...
將抗原結合到抗體微珠基質(zhì)上的zui簡單方法是將微珠裝到一個層析柱內(nèi)，將抗原溶液流經(jīng)層析柱，當抗原流經(jīng)層析柱時結合到抗體上而被固定，直到洗脫時才洗脫下來。這種方法的效率是根據(jù)抗原與固定的抗體之間的接觸時間決定的，所以抗原抗體之間的作用時間可以用低流速而延長。這種方法zui大一個問題就是某些蛋白非特異性結合到分離柱上，這些蛋白可以出現(xiàn)在洗脫液中，從而使純化效率降低?；|(zhì)本身和抗體基質(zhì)復合物具有與待檢抗原溶液中蛋白質(zhì)非特異性結合的表面活性。雖然這些反應較正常的抗原—抗體反應要弱得多...
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